JEB-13472 高灵敏大鼠神经肽Y（NP-Y）ELISA试剂盒公司免费代测2
、洗板：重复5的操作。
微量的免疫沉淀反应。4.定量检测体液中抗原或抗体成分。
十二、高灵敏大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒公司免费代测操作技术流程
7.终止液(1N硫酸)12ml
、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
八、标本的收集和保存
、样本稀释液中本身有本底的一个较小的读数。也是ELISA的一个局限性，免疫的很多反应稀释液洗涤液发挥了很重要的作用，不加的话效果不明显，但是加了以后有些成分可能有一部分的干扰作用。可以比较不同的厂家的盒子都存在这些局限性的，但不影响最终的结果。ELISA严格的说就是一个半定量的方法。
a)洗液不要溢出孔外，以免污染相邻的孔，特别是每次洗板的前两遍，若高浓度的孔污染了低浓度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定会增高。
标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于℃保存，但应避免反复冻融.
样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非性干扰。
十七、试剂盒常见问题
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
问：比如说我偶然发现只加样本稀释液的也出现浅，这怎么解释呢？
样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非性干扰。
（2）流水冲洗式流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为彻底，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。
、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
a)洗液不要溢出孔外，以免污染相邻的孔，特别是每次洗板的前两遍，若高浓度的孔污染了低浓度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定会增高。
问：特殊稀释液是做什么的？
样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
洗涤：洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种，过程如下：
e)不能减少洗液体积、洗板时间和次数。洗板时间太短，洗板效果不佳。延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。
简介酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA)是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗原（抗体），再加相应酶标记抗体（抗原），生成抗原（抗体）-待测抗体（抗原）-酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
解决方法：校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密。
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
批内与批见应分别小于9%和11%
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试剂盒组成
尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
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、温育：重复4的操作。
公司文化
答：ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是典型的由测定操作引起的问题，常见原因如下：
标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。
7.终止液(1N硫酸)12ml
3.标准品0.5ml×2
．不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；
样品稀释前应充分混匀。
可能原因：ELISA加样本及试剂量不准；孔间不一致；
、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2.标记抗体(30倍浓缩，HRP标记抗体)0.4ml
[{ID:7741635,ClassID:3144,ClientClassID:346064,ProvinceID:15,CityID:86,UserID:186628,MarketUpdateTime:2016/7/58:58:32,CompanyID:164676,Company:南京金益柏生物科技有限公司,Type:JEB-13472,Name:高灵敏大鼠神经肽Y（NP-Y）ELISA试剂盒公司免费代测,Address:,Descrip:高灵敏大鼠神经肽Y（NP-Y）ELISA试剂盒公司免费代测简介酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA）是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。,Detail:
、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
1.微孔板(固相抗体)96well
、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔，在标准品孔中加入标准品50L；待测样本孔中先加入待测样本10L，再加样本稀释液40L（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
3.标准品0.5ml×2
计算
要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。
c)用干净的滤纸，不要用卫生纸，因为细小粉尘或者碎屑容易吸附到孔底，导致洗板不干净，结果偏高或偏低，重复孔的数值也会相差很大。
十五、ELISA试剂盒性能
、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
企业：锐意创新、追求卓越
实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。
试剂盒组成
一、高灵敏大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒公司免费代测简介酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA)是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗原（抗体），再加相应酶标记抗体（抗原），生成抗原（抗体）-待测抗体（抗原）-酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
十四、ELISA试剂盒检测范围和保存条件及有效期
、终止：取出酶标板，每孔加终止液50L，终止反应（颜色由蓝色立转）。
e)不能减少洗液体积、洗板时间和次数。洗板时间太短，洗板效果不佳。延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。
企业用人：任人唯贤、唯才是用、团队至上
我们拥有专业的客服团队提供最贴心的优质服务，以客户为中心第一时间解决客户关于高灵敏大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒公司免费代测的问题。我们与南京各大高校均有合作，提供专业免费代测和技术外包服务。
4.EIA缓冲液(1%BSA,0.05%Tween-20含有PBS)30ml
可能原因：加样过快，孔间发生污染；
、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50L，空白对照孔不加。
企业价值观：诚信、专业、严谨、优质、高效
不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
免疫酶染色各种细胞内成分的定位。
血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。
重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近；
答：可能的原因：
九、高灵敏大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒公司免费代测标本要求
五、高灵敏大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒公司免费代测特点
、样本稀释液中本身有本底的一个较小的读数。也是ELISA的一个局限性，免疫的很多反应稀释液洗涤液发挥了很重要的作用，不加的话效果不明显，但是加了以后有些成分可能有一部分的干扰作用。可以比较不同的厂家的盒子都存在这些局限性的，但不影响最终的结果。ELISA严格的说就是一个半定量的方法。
六、ELISA法的应用
十、ELISA操作中的洗涤
高灵敏大鼠神经肽Y（NP-Y）ELISA试剂盒公司免费代测简介酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA）是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。
问：ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是什么原因造成的？
5.标记抗体稀释液(1%BSA,0.05%Tween-20含有PBS)12ml
答：一般情况都不要用的，他的最大的用途就是稀释标准品。但是,现在标准品已经稀释好了所以不需要用了。如果你需要更多的标准品，可以用他来稀释。
8.洗涤缓冲浓缩液(40倍浓缩，0.05%Tween-20的磷酸缓冲液)50ml
血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
解决方法：重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；加样不要过快。
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十、ELISA操作中的洗涤
为浓缩液，配有稀释液，稀释后直接可用，无需另行配置。
d)每次拍板不要重复在一个地方拍，特别是洗去酶的步骤；拍板不宜过轻，否则拍不干净，拍板很用力不会对蛋白有什么影响。但注意不要太重，以至把板条给拍断。每次洗板后轻叩几下，最后一次一定要扣干净。
4.EIA缓冲液(1%BSA,0.05%Tween-20含有PBS)30ml
我们位于六朝古都江苏省南京市白下高新技术产业园，是一家专业从事“自主产品研发生产、技术服务、知名品牌代理”的高新技术生物公司。以为生命科学工作者提供全方位高水平的产品及技术服务为经营旨，有别于众多国内企业单纯代理贸易的简单运营模式，强调高端技术的掌握和优化、自主产品的研发和生产，强调良好的售后服务和技术支持，努力打造中国乃至全球知名品牌。公司拥有高水平的技术研发团队，建立多种技术平台，产品涉及生物学、细胞生物学、免疫学、药学等领域。公司拥有高水平的博士技术研发团队，多名技术具有国外学习经历或跨国。公司同时聘请南京大学、东南大学、中国药科大学、南京中医药大学等高校重点实验室学科带头人担任公司技术顾问。
、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔，在标准品孔中加入标准品50L；待测样本孔中先加入待测样本10L，再加样本稀释液40L（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
．有效期：6个月
d)每次拍板不要重复在一个地方拍，特别是洗去酶的步骤；拍板不宜过轻，否则拍不干净，拍板很用力不会对蛋白有什么影响。但注意不要太重，以至把板条给拍断。每次洗板后轻叩几下，最后一次一定要扣干净。
（1）浸泡式a.吸干或甩干孔内反应液；b.用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去）；c.浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；d.吸干孔内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；e.重复操作c和d，洗涤3-4次（或按说明）。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20，其浓度可在0.05%-0.2%之间，高于0.2%时，可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
b)特别注意：设计实验的时候要考虑实验孔的，甩掉洗液时，空白孔、低浓度孔或阴性对照组在或一侧或分开最好。同时注意甩掉洗液的动作翻转（从正上方旋转120－150度）要迅速、干脆。甩板不要手腕左右摇摆、旋转来甩液体！甩出后以直线方式补2－3次甩出液体。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度性、性相结合，以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂进行免疫测试，所以具有很高的灵敏度。
c)用干净的滤纸，不要用卫生纸，因为细小粉尘或者碎屑容易吸附到孔底，导致洗板不干净，结果偏高或偏低，重复孔的数值也会相差很大。
冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等产生作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复混匀即可。
6.显色液(TMB底物液)15ml
2.标记抗体(30倍浓缩，HRP标记抗体)0.4ml
、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。
其抗原抗体反应具有高度的性。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
七、ELISA实验要点
十六、关于我们
、洗板时有交叉感染
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
（1）浸泡式a.吸干或甩干孔内反应液；b.用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去）；c.浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；d.吸干孔内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；e.重复操作c和d，洗涤3-4次（或按说明）。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20，其浓度可在0.05%-0.2%之间，高于0.2%时，可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
十一、样本处理及要求
要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。
血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
1.试剂盒保存：；2-8℃。
、显色：每孔先加入显色剂A液50L，再加入显色剂B液50L，37℃避光显色15min。
6.显色液(TMB底物液)15ml
1.微孔板(固相抗体)96well
我们位于六朝古都江苏省南京市白下高新技术产业园，是一家专业从事“自主产品研发生产、技术服务、知名品牌代理”的高新技术生物公司。以为生命科学工作者提供全方位高水平的产品及技术服务为经营旨，有别于众多国内企业单纯代理贸易的简单运营模式，强调高端技术的掌握和优化、自主产品的研发和生产，强调良好的售后服务和技术支持，努力打造中国乃至全球知名品牌。公司拥有高水平的技术研发团队，建立多种技术平台，产品涉及生物学、细胞生物学、免疫学、药学等领域。公司拥有高水平的博士技术研发团队，多名技术具有国外学习经历或跨国。公司同时聘请南京大学、东南大学、中国药科大学、南京中医药大学等高校重点实验室学科带头人担任公司技术顾问。
5.标记抗体稀释液(1%BSA,0.05%Tween-20含有PBS)12ml
冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等产生作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复混匀即可。
8.洗涤缓冲浓缩液(40倍浓缩，0.05%Tween-20的磷酸缓冲液)50ml
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．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
b)特别注意：设计实验的时候要考虑实验孔的，甩掉洗液时，空白孔、低浓度孔或阴性对照组在或一侧或分开最好。同时注意甩掉洗液的动作翻转（从正上方旋转120－150度）要迅速、干脆。甩板不要手腕左右摇摆、旋转来甩液体！甩出后以直线方式补2－3次甩出液体。
（2）流水冲洗式流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为彻底，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。
十三、高灵敏大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒公司免费代测计算
研究抗酶抗体的合成。
