有效解决RNase污染问题,使RNA完好无缺!
作者:IVD资讯
RNase污染无处不在
RNase(Ribonuclease,核糖核酸酶)是一类能够催化RNA降解为小分子RNA的核酸酶,广泛存在于真核、原核生物的所有细胞和组织中,通常有极强活性,RNA样本中微量的RNase污染足以导致其完全降解。实验室中RNase污染的主要来源有:
外源性污染源
1)实验中使用的水溶液、反应体系的各组分试剂、枪头等在内的实验耗材;
2)实验大环境的污染,RNase 存在于空气、灰尘和大多数物体表面;
3)实验人员的皮肤或唾液等。
内源性污染源
所有组织样品均含有内源性RNase。
如何从源头上避免RNase污染
RNase的无处不在,使得实验过程中,难以保存RNA样本的完整性,导致实验失败或影响RNA分析的结果。因此,从源头上避免RNase污染十分必要,一方面要严格控制外源性RNase的污染,另一方面要最大限度地抑制内源性的RNase。
控制外源性RNase污染的方法:
1. 操作人员全副武装
在实验过程中戴手套可避免源自人手的RNase污染;触摸皮肤、门把手及普通物体表面后更换手套;
2. 使用专业仪器与试剂
RNA操作专用的移液枪;使用RNase-free的枪头和离心管;使用RNase-free的化合物与试剂;
3. 选择实验操作环境
远离/遮蔽通风孔或开放窗口,走动较少的区域作为RNase-free区域;
4. 其他注意的点
在RNA提取和分析期间,不要进行其他可能引起RNase 污染的实验。
抑制内源性RNase活性的方法
1. 样本保存
组织取样后若不直接提取RNA,要及时用液氮迅速冷冻存于-80°C环境,并尽早进行实验,这样可使RNA的降解达到最少。
2. 添加抑制剂
在细胞裂解液中加入RNase 抑制剂(RNase inhibitor),使破碎细胞与灭活RNase 同步进行,最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNase的活性。
RNase抑制剂可有效避免RNase污染
RNase抑制剂(RNase inhibitor,简称RNasin)是存在于人的胎盘中的一种特异性RNase抑制剂,能够特异地与RNase以非共价键结合形成复合体,造成RNase失活,从而保护RNA的完整度。目前,RNasin主要用于cDNA合成,体外转录,体外翻译,以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解,还可用于特定RNase活性的鉴定等。
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